Микробиология и микология. Особо опасные инфекционные болезни, микозы и микотоксикозы. Учебник

Маннапова Р.Т.

Возрастное ограничение: 0+ Жанр: Наука Издательство: Проспект Дата размещения: 04.06.2018 ISBN: 9785392283439 Язык: Объем текста: 334 стр. Формат: epub

Оглавление

Список сокращений. Предисловие

Раздел I. Особо опасные инфекционные болезни

Раздел II. Микозы и кормовые микотоксикозы

Раздел III. Микробиология продуктов животного происхождения

Приложения. Схемы лабораторной диагностики и специфической профилактики болезней

Краткий словарь микробиологических и иммунологических терминов

Основоположники микробиологии

Нобелевские премии в области микробиологии и иммунологии

Для бесплатного чтения доступна только часть главы! Для чтения полной версии необходимо приобрести книгу

Раздел I.
Особо опасные инфекционные болезни

Глава 1.
Грамположительные кокки

1.1. Возбудители стафилококкозов животных

Стафилококкозы — бактериальные инфекции, характеризующиеся гноеродными процессами различной этиологии, вызванными патогенными стафилококками.

Стафилококк обнаружен Р. Кохом (1878), выделен из гноя фурункула человека Л. Пастером (1880), обстоятельно изучен Ф. Розенбахом (1884).

Стафилококки подразделяются на три вида: Staphilococcus аureus — патогенные; S. epidermidis — условно-патогенные, постоянные обитатели кожи и слизистых оболочек; S. saprophyticus — непатогенные (род Staphylococcus семейство Micrococcaceae).

Патогенные стафилококки проявляются в виде абсцессов, фурункулов, карбункулов, флегмонов, маститов, метритов, пневмонии, сепсиса. Могут вызывать пищевые отравления людей.

Лабораторная диагностика стафилококкозов основана на результатах бактериологического исследования, которая включает бактериоскопию, выделения чистой бактериальной культуры и биопробу.

Для прижизненной диагностики при стафилококкозах в лабораторию направляют раневой экссудат, гной; при маститах — пробы молока. Раневой экссудат, гной берут стерильным ватным тампоном с палочкой, вставляют в стерильную пробирку и упаковывают. Жидкий экссудат, не вскрытый абсцесс можно отсосать стерильной иглой со шприцем и слить в стерильную пробирку. При подозрении на сепсис в лабораторию направляют кровь. Для посмертной диагностики направляют кусочки пораженных тканей и органов, кровь.

Морфология. Стафилококки имеют шаровидную форму. Располагаются часто в виде неправильных бессистемных скоплений. В мазках из бульонных культур имеют вид микро- или диплококков, из агаровых культур — расположены в виде скоплений, напоминающих гроздь винограда. Диаметр кокков 0,5−1,5 мкм. Грамположительны (рис. 1.1), спор не образуют, особо патогенные штаммы могут образовывать капсулу. Неподвижны.

Культуральные свойства. Стафилококки хорошо развиваются на обычных питательных средах с рН 7,2−7,4, при температуре 30−37 0С в аэробных и анаэробных условиях (факультативные анаэробы). При загрязнении материала посторонней микрофлорой используют селективные питательные среды: солевой МПА, МПБ с 8−10% хлорида натрия, желточно-солевой агар (ЖСА), 3,5%-ный МПА с добавлением 3 мл 0,1%-ного раствора кристаллвиолета (патогенные стафилококки образуют колонии фиолетового или оранжевого цвета). На МПБ растут интенсивно, вызывают равномерное помутнение среды, образуют рыхлый осадок. Иногда при достаточной аэрации образуют поверхностную пленку. На плотных средах стафилококки растут в виде выпуклых с ровными краями непрозрачных колоний правильной круглой формы диаметром 2−7 мм. При комнатной температуре, широкой аэрации и рассеянном свете стафилококки вырабатывают золотистые, белые, лимонно-желтые и другие пигменты. Лучшая среда для выделения стафилококка — кровяной агар, где они вызывают гемолиз (рис. 1.2).

Биохимические свойства. Применяются для определения патогенности стафилококков. Стафилококки ферментируют многие углеводы. Штаммы, ферментирующие маннит, являются патогенными (но эта способность не стабильна!). Ферментацию маннита определяют путем посева его на МПБ, содержащий 0,5% маннита, индикатор Андрэдэ + газовки (пробирки Уленгута для улавливания газа). После 1−2-суточной инкубации, при температуре 37 0С среда с патогенным штаммом микроба краснеет, в газовках иногда скапливаются пузырьки газа.

Патогенные стафилококки обладают способностью коагулировать плазму крови. Плазмокоагулязную активность определяют в специальной реакции плазмокоагуляции (РПК). Коагулаза — фермент стафилококков, который коагулирует плазму крови. Петлю бактериальной массы исследуемой культуры, снятой с поверхности агаровой среды, смешивают с 0,5 мл плазмы крови кролика (человека), не разведенной или разведенной стерильным физиологическим раствором в соотношении 1 : 4, инкубируют при 37 0С. Учет результата через 4 и 24 часа. Положительная реакция — образование сгустка.

Патогенные стафилококки продуцируют фибринолизин. Для выявления фибринолитической способности пробирки с положительными результатами плазмокоагулирования оставляют в термостате на несколько суток. При наличии фибринолизина коагулированная плазма разжижается.

Тест на гемолизин. Исследуемую культуру засевают на чашку Петри с 5%-ным кровяным агаром и инкубируют при 37 0С 24 часа. Лизис эритроцитов проявляется в виде светлой (бета-гемолиз) или полупрозрачной (альфа-гемолиз) зоны вокруг колоний. Гемолитическую активность можно определить путем посева исследуемой культуры в 1−5%-ной кровяной бульон, который после культивирования выделяющего гемолизин микроба становится прозрачным за счет лизиса эритроцитов.

Гемолититическая способность стафилококков бывает не всегда выраженной. Скрытую (потенциальную) способность стафилококков выявляют на 5%-ном кровяном МПА. По диаметру чашки Петри делают прямой полоской посев бета-гемолитического штамма стафилококка. Перпендикулярно этой полоске с двух сторон высевают по 4−5 испытуемых штаммов стафилококков. После суточного инкубирования в непосредственной близости к высеянному по диаметру бета-гемолитическому штамму стафилококка образуеся зона гемолиза.

Стафилококки продуцируют лецитиназу. Для ее определения к расплавленному и остуженному до 50−60 0С МПА добавляют взбитые яичные желтки и тщательно перемешивают. После застывания делают посев испытуемой культуры. Лецитиноположительные штаммы стафилококка через 24−48 ч вокруг колоний образуют зону помутнения, окруженную радужным венчиком.

Тест на ДНК-азу. Исследуемую культуру засевают «штрихом» на питательную среду с ДНК и культивируют при 37 0С 24 ч. Затем на поверхность среды с бактериальной культурой наливают 1 н. раствор соляной кислоты. Положительный результат — при гидролизе ДНК вдоль «штриха» культуры видна светлая зона (питательная среда с ДНК: в расплавленный МПА добавляют 10%-ный раствор ДНК до конечной 0,2%-ной концентрации, перемешивают, автоклавируют при 120 0С 15 мин и разливают в чашки Петри).

Патогенные стафилококки растут на среде с кристаллвиолетом, не патогенные не растут.

Биопроба, токсигенные свойства. Заражают лабораторных животных для подтверждения токсигенных свойств выделенного стафилококка. Патогенные стафилококки продуцируют несколько токсинов, обладающих разносторонним действием на организм:

• энтеротоксин — при попадании с пищей, с кормом в пищеварительный тракт вызывает пищевую токсикоинфекцию (биопроба на 4−8 недельных котятах, которым с молоком дают бульонную культуру стафилококка, при наличии токсина через 1−2 ч возникают симптомы гастроэнтерита и рвота);

• летальный токсин общего действия — при внутривенном введении бульонной культуры стафилококка кроликам через 15−30 мин наступает смерть животного с признаками острой токсемии: одышка, учащенное сердцебиение, парезы);

• некротический токсин — вызывает некроз тканей (при внутрикожном введении стафилококковой культуры кроликам на месте инъекции развивается омертвение кожи);

• гемотоксин — обладает выраженным гемолитическим действием (лизис эритроцитов). При посеве стафилококков на кровяной агар вокруг колоний образуются обширные зоны гемолиза;

• лейкоцидин — вызывает лизис лейкоцитов, гибель гематобластов костного мозга и нервных клеток;

• в стафилококковых культурах выделен также антикоагулянт, препятствующий свертыванию крови; гемагглютинины;

• стафилококковый экзотоксин, обезвреженный 0,3−0,5%-ным формалином при температуре 37 0С в течение 7−28 сут., при парентеральном введении людям и животным обусловливает синтез специфического антитоксина, способного вступать в реакцию с токсином.

Профилактика: соблюдение зоогигиенических и санитарно-гигиенических условий, устранение витаминной недостаточности, предупреждение травматизма, систематические дезинфекции, своевременная обработка ран.

Схемы лабораторной диагностики и биопрепараты. См. Приложения.

1.2. Возбудители стрептококкозов животных

1.2.1. Мастит коров

Стрептококкозы — (Streptococcosis) — инфекционное заболевание молодняка сельскохозяйственных животных, характеризующееся тяжелыми септическими явлениями, воспалением органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и суставов. У взрослых животных проявляются эндометритами и маститами.

В патологии сельскохозяйственных животных наибольшее значение имеют следующие виды гноеродных стрептококков (род Streptococcus, семейство Streptococcaceae): а) Streptococcus agalactiae — возбудитель мастита коров; б) Streptococcus equi — возбудитель мыта лошадей; в) Streptococcus pneumoniae — возбудитель стрептококковой (диплококковой) септицемии молодняка сельскохозяйственных животных: г) Streptococcus pyogenes — возбудители гнойно-некротических процессов.

Мастит коров. Основной возбудитель — Streptococcus agalactiae. Но в этиологии мастита, кроме Streptococcus agalactiae, могут принимать участие до десятков других видов микроорганизмов, в том числе стрептококков, стафилококков, эшерихии, вульгарный протей. Мастит — это воспаление молочной железы коровы. Мастит у коровы возникает не только во время лактации. Это заболевание может развиться и во время сухостоя, когда животное отдыхает перед очередным отелом. Мастит у коров приводит к снижению продуктивности животных. Заболевание не только снижает количество молока у коровы, но также может сделать его непригодным для употребления. При сильном воспалительном процессе животное испытывает все последствия тяжелейшей интоксикации, кроме того, маститы негативно влияют на внутриутробное развитие плода и физиологическое состояние новорожденных телят. Лишенные молозива, телята не получают полноценную иммунную защиту. При болезнях вымени патогенные штаммы кишечной палочки и стафилококков легко передаются молодняку именно через молозиво, вызывая желудочно-кишечные и легочные заболевания и гибель приплода.

Мастит у коровы имеет несколько вариантов развития: полное выздоровление; переход в хроническую форму; скрытое воспаление; потеря четверти.

Формы мастита: субклинический и клинический.

Субклинический мастит — этот тип воспаления вымени нельзя заметить по внешним признакам. Для того чтобы провести диагностику этого мастита необходимо провести лабораторное исследование — анализ на поражение калифорнийским мастит-тестом (CMT) и подсчет соматических клеток (SCC). Этот тип воспаления, в зависимости от возбудителя заболевания, может перейти в клинический или вылечиться самостоятельно.

Клинический мастит проявляется в легкой, умеренной, тяжелой и гангренозной форме. При легкой форме молоко выделяется хлопьями или комками и непригодно для употребления. Вымя при этом выглядит совершенно нормально. Чаще всего в такой форме заболевание во многих хозяйствах даже не диагностируется. При умеренной форме вымя отвердевает, краснеет, набухает и становится болезненным, температура воспаленной четверти повышается. Внешний вид молока также изменяется. Отек вызывается сгустками молока, которые блокируют молочные каналы. Как следствие, снижается продуктивность коровы. Для тяжелой формы мастита характерно: молоко становится водянистым, похоже на сыворотку, может быть с примесью крови. Продуктивность коровы резко снижается. Инфекция способна вызывать снижение уровня кальция в крови, при этом у коров появляются симптомы молочной лихорадки (гипокальцемии). При таком мастите у животного все признаки сильной интоксикации. Гангренозную форму мастита можно диагностировать по охлаждению, голубоватому оттенку четверти. Мастит этого типа ведет к потере четверти вымени.

Причины мастита коров. Выделяют инфекционные факторы, приводящие к данному заболеванию, и неинфекционные. Среди болезнетворных микроорганизмов нередко встречаются патогенные стрептококки, стафилококки, а также микоплазмы, синегнойная и кишечная палочки, сальмонеллы и др. Чтобы микробы могли проникнуть в молочную железу коровы, бывает достаточно вытереть ее вымя грязным полотенцем или обмыть грязной водой. Также в случае инфицирования рук самой доярки у коровы может развиться мастит.

Если вымя было каким-либо образом травмировано, тогда также возникает мастит. Поэтому любые уколы, щипки, ссадины, удары, переохлаждение или обморожение могут стать причиной развития данного заболевания. В сухостойный период воспаление вымени возникает под воздействием неблагоприятных факторов, снижающих общий иммунитет и резистентность организма и тканей вымени. Причиной могут служить: антисанитарные условия содержания; сквозняки, неполноценное кормление; нарушение техники доения и порядка запуска. Неправильный запуск коров является причиной проникновения инфекции в ткани вымени и развития воспалительного процесса, который проявляется уже после отела.

Необходимо своевременно поставить диагноз на мастит.

Сухостойный период — самый оптимальный для проведения лечения коров от мастита, а также своевременной диагностики его скрытых форм. В этот период на мастит коров исследуют дважды: в самом начале, а затем за 10−15 дней до отела. Если корова здорова, в первые 20−30 дней сухостоя секрета много, он жидкий, серовато-белого цвета, без хлопьев, во второй половине сухостоя секрета мало (3−5 мл), он вязкий, тягучий, клейкий, желтовато-коричневого цвета. В любом случае, даже если видимых изменений в структуре вымени и качестве молочного секрета нет, необходимо сделать лабораторный анализ на скрытый мастит. Чаще всего мастит наблюдается в течение первых двух месяцев после запуска коровы и после отела.

Период запуска — самый ответственный. Необходимо следить за состоянием вымени. При любом покраснении проводится пробное доение четверти. В первый месяц запуска у здоровой коровы молоко жидкое, без изменения цвета. Если имеются хлопья, значит, животное заболело. Во второй месяц запуска вместо перегоревшего молока в вымени образуется секрет, по консистенции напоминающий мед. Его немного — 3−4 мл. Более жидкий секрет сероватого оттенка — признак мастита.

После отела необходимо проверить состояние молозива коровы (молозивный период длится 5−7 дней). Тест можно легко проделать в домашних условиях без помощи реактивов. Молозиво наливается в пробирку и ставится на час в холодильник. Если за это время жидкость расслоится — у коровы мастит и кормить теленка корова не должна.

Лечение мастита. Многое зависит от того, какая форма мастита развилась. При первых симптомах заболевания нужно сразу начать лечение мастита у коров. При развитии хронической формы удои значительно сокращаются, а само заболевание может дойти до гангрены вымени. Больное животное нужно отделить от стада и поселить в чистое и сухое стойло. Сочные корма давать не следует, а лучше свежее сено. Сдаивание проводят каждые 6–8 ч в отдельную посуду, выдоенное молоко потом дезинфицируют и выливают. Доить на пол или выливать непродезинфицированное молоко нельзя, так как болезнетворные микробы будут распространяться на вымя больного животного и на здоровых особей.

Обязательное лекарство при маститах любой формы — антибиотики. Они могут быть как широкого спектра действия, так и специфическими. Назначаются после определения чувствительности к ним микроорганизмов. Также применяют противовоспалительные препараты и делают на вымя различные аппликации, чтобы здоровье животного восстановилось быстрее. Во время лактации антибиотиками лечить коров нельзя, поскольку в этом случае молоко будет непригодно для использования. При остром воспалительном процессе можно назначить промывание молочных цистерн дезинфицирующими растворами или настойками трав.

Профилактика мастита. Начинать профилактику следует с улучшения гигиены содержания и кормления животных, а также постоянного обследования оборудования и коров. Заболевших животных следует изолировать от здоровых, а лечение проводить своевременно и в полной мере. Очень важно снизить возможность проникновения болезнетворных микроорганизмов в вымя. Для этого перед каждой дойкой соски необходимо обмывать теплой водой. После дойки на кончике соска остается молочная капля — она также может служить источником инфекции, так как молоко — прекрасная среда для размножения бактерий. Сосковое отверстие после доения остается открытым от 30 мин до 2 ч, и времени этого вполне достаточно, чтобы болезнетворные микробы проникли внутрь. После дойки соски животного также необходимо дезинфицировать, для этого подойдет 1%-ный р-р хлористого йода (1 мл на 100 мл воды) или 3−5%-ный раствор ЭМС-Й, вид А (1 ч. ложка на 100 мл воды). Соски необходимо погрузить в дезинфицирующий раствор на пару минут.

Важное значение имеет правильный запуск коров. За неделю до начала запуска количество сочных и концентрированных кормов необходимо снизить и коров перевести на однократное доение в течение 4−5 дней. Далее их доят через 1−2 дня и прекращают доить, когда суточный удой составит 0,5−1 кг молока. Сухостойный период составляет 60 дней, на протяжении всего этого времени обязательно следует проводить диагностику маститов.

1.2.2. Мыт лошадей

Мыт лошадей — острое инфекционное заболевание лошадей, преимущественно молодняка, характеризующееся гнойно-катаральным воспалением слизистой оболочки носоглотки и абсцессами подчелюстных лимфатических узлов.

Болеют молодые лошади, чаще от 6 мес. до 5 лет. Случаи заболевания животных старших возрастов наблюдаются редко. Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные, а также здоровые бактерионосители. Заражение происходит чаще алиментарным и реже аэргенным путем. Предрасполагающими факторами являются простуда, транспортировка, плохие условия содержания и др. Проявляется мыт спорадически или в виде эпизоотических вспышек. Обычно летальность не превышает 5%, однако при неблагоприятных факторах мыт может распространяться быстро и в таких случаях летальность достигает 30−70%.

Инкубационный период длится 1−15 дней. Болезнь может протекать остро и подостро. Различают типичную и атипичную формы (метастатическая и абортивная), иногда встречается генитальная форма мыта.

Для типичной формы характерна высокая температура тела (40−41 0С), пониженный аппетит, угнетение, ринит, слизисто-гнойное истечение из носа, кашель, воспаление подчелюстных лимфатических узлов с последующим нагноением и вскрытием их. При пальпации области глотки выявляется сильная болезненность. Дыхание учащенное и сопящее. В процесс вовлекаются многие лимфатические сосуды.

При метастатическом мыте образуются абсцессы в легких и других внутренних органах и лимфоузлах, постоянно держится высокая температура, животное истощено.

Для абортивной формы характерны повышение температуры тела, ринит, незначительное увеличение подчелюстных лимфатических узлов без нагноения. Через 5−7 дней наступает выздоровление.

Генитальная форма мыта проявляется катарально-гнойным воспалением слизистой оболочки влагалища, регионарных лимфоузлов, иногда гнойным маститом. У жеребцов протекает в виде острого катарально-гнойного воспаления головки полового члена и мочеиспускательного канала.

Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить сап, грипп лошадей. При сапе чаще наблюдают односторонние гнойные истечения из носа, обнаруживают специфические узелки и язвы на носовой перегородке. Подчелюстные лимфоузлы при сапе увеличены, плотные и не абсцедируют. Сап часто протекает при нормальной температуре тела и сохраненном аппетите.

Лечение. Больных животных немедленно изолируют в отдельное сухое, теплое помещение без сквозняков. Проводят вскрытие абсцессов и обработку раны. Применяют антибиотики (геомицин-ретард, терравитин, линкомицин, кламоксил и другие внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг живой массы, 1 раз в 3 дня); сульфаниламидные препараты (триметасул или триметазульф и др.). Внутривенно 150−200 мл 33%-ного спирта, приготовленного на 20−30%-ной глюкозе с добавлением 1%-ного норсульфазола (при метастатическом мыте).

Профилактика и меры борьбы. В целях профилактики мыта необходимо молодняк обеспечить полноценным кормлением, содержать в сухих, хорошо вентилируемых конюшнях, предоставлять ежедневный моцион; постоянно оберегать жеребят от воздействия простудных факторов (сквозняки, водопой из холодных водоисточников, пребывание под холодным дождем).

Для предотвращения возможного заноса возбудителя мыта завоз лошадей и приобретение фуража производят только из хозяйств, благополучных по данной болезни. Всех вновь поступивших лошадей содержат обособленно, в профилактическом карантине 30 дней.

В случае возникновения мыта конеферму (табун) объявляют неблагополучной и накладывают ограничения. Запрещают выводить лошадей их неблагополучной фермы и вывозить фураж, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, допуск посторонних лиц на ферму. Проводят поголовный клинический осмотр и термометрию лошадей. Больных животных изолируют и лечат, остальных — ежедневно осматривают, организуют им индивидуальное содержание, кормление и водопой, проводят дезинфекцию помещений. Хозяйство объявляют благополучным и снимают ограничения через 15 дней после выздоровления последнего больного животного и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий (поголовный клинический осмотр, заключительная дезинфекция).

1.2.3. Диплококковая септицемия молодняка

Диплококковая септицемия молодняка — инфекционная болезнь преимущественно мо­лодняка сельскохозяйственных животных, которая прояв­ляется признаками сепсиса.

Возбудитель − Streptococcus pneumoniae (пневмококки). Относится к семейству Streptococcaceae роду Streptococcus, насчитывающему почти 40 видов. У новорожденных пупочную инфекцию и септическую форму преим-ущественно вызывает гемолитический S. zooepidermicus группы С; стрептококковую пневмонию телят и поросят — S. pneumoniae син. Diplococcus lance-olatus); лимфадениты, артриты и абсцессы в тканях — серогруппы стрептококков С, D, Е и L. Патогенные стрептококки — неподвижные, в диаметре не менее 2 мкм, грамположительные, имеют капсулу, микроаэрофилы. Об­ладают факторами вирулентности (адгезины, гемолизины, гиалуронидаза, токсины). Принадлежат к слабоустойчивым во внешней среде микроорганизмам: особенно чувствительны к солнечным лучам и высушиванию. Однако возбудитель, высушенный в белковой среде (кровь, гной, мокрота), сохраняется до 2 мес., в молоке — в течение часа. Нагревание при 55 0С убивает его за 10 мин, 2%-ный раствор фенола — за 5 мин, 2%-ный раствор формальдегида и 20%-ная свежегашеная известь — за 10−15 мин. Возбудитель по устойчивости к дезосредствам относится ко 2-й группе (устойчив).

Пути заражения — алиментарный и аэро­генный. Заболевает молодняк с первых дней жизни.

Патогенез. Попав в организм, возбудитель размножа­ется в месте внедрения, а затем разносится с током крови и лимфы. Токсины, выделяемые стрептококками, угнетают иммунную систему, вызывая иммунодефицит.

Клинические признаки и течение. Инкубационный период — 1−2 дня, иногда до недели. Болезнь протекает сверхостро, остро, подостро и хронически. Сверхострое течение (септикотоксическая форма): внезапная слабость, конъюнктивит, ринит, повышение температуры (40−42 0С), одышка, хрипы, аритмия, цианоз слизистых и перед смертью — истечение из ноздрей пенистой жидкости (отек легких). Животное погибает через несколько часов. Острое течение: гипертермия (41−42 0С), учащенный слабый пульс и дыхание, обильное слезотечение, катарально-гнойные истечения из ноздрей, отсутствие аппетита, аритмия, у новорожденных воспаляется пупочный канатик, нарастающая слабость, депрессия, гибель через 1−2 дня с признаками септицемии (септическая форма). Подострое течение: слабая лихорадка и плохой аппетит часто остаются незамеченными. Вскоре появляются ведущие признаки поражения легких (легочная форма), суставов (суставная форма), пищеварительного тракта (кишечная форма). Возможна и смешанная форма с признаками катаральной бронхопневмонии, гастроэнтерита и воспаления суставов. Животные худеют, глаза глубоко западают в орбиты. Смерть при несвоевременном лечении — через 2−3 дня. Хроническое течение наблюдают у животных старшего возраста (у телят и жеребят 4 мес., поросят и ягнят — старше 1−2 мес.): перемежающаяся лихорадка, периодическая диарея, пневмония, катарально-гнойный ринит, кашель становится частым, влажным, появляются хрипы.

Тяжесть болезни зависит от степени поражения легких. Патологоанатомические исследования. При сверхостром течении характерные патологоанатомические процессы не успевают развиться. Находят лишь кровоизлияния в слизистой оболочке желу­дочно-кишечного тракта, брюшине, в эпи- и эндокарде.

Клиника. При остром течении в зависимости от путей заражения поражаются преимущественно дыхательная или пищеварительная системы. При аэрогенном заражении: в верхних дыхательных путях — острое катаральное воспаление, в бронхиальных и средостенных лимфоузлах — серозное воспаление, в лег­ких — серозно-геморрагическая или крупозная пневмония, в плевре и перикарде — фибринозное воспаление. Селе­зенка увеличена, септическая, резиноподобной консистен­ции, выявляются множественные кровоизлияния в эпи- и эндокарде, в плевре, зернистая дистрофия в печени, поч­ках и миокарде.

При алиментарном заражении поражается желудочно-кишечный тракт. В сычуге и тонком кишечнике — острое катаральное или геморрагическое воспаление. Кроме того, обнаруживают морфологические признаки сепсиса. Могут одновременно поражаться дыхательная и пищеваритель­ная системы. При хроническом течении болезни основные патологоанатомические процессы локализуются в легких. В них — фибринозно-некротическая пневмония, которая часто ос­ложняется серозно-фибринозным плевритом и перикарди­том, обнаруживают также инкапсулированные абсцессы в легочной ткани, в суставах — серозно-фибринозное или гнойное воспаление.

Патологоанатомическая картина. При остром течении отмечается: геморрагический диатез; септическая селезенка (резиноподобная, каучуковая консистенция); серозное воспаление бронхиальных и средостенных лимфоузлов; зернистая дистрофия печени, почек, миокарда; серозно-геморрагическая или крупозная пневмония (с преимущественным поражением передних и средних до­лей); серозно-фибринозный плеврит и перикардит. Для хронического течения характерны: крупозная некротическая или фибринозно-гнойная абсцедирующая пневмония; серозно-фибринозный плеврит и перикардит; серозно-фибринозные или гнойные артриты. При диагностике стрептококковой септицемии учитывают эпизоотическую ситуацию, воз­раст животного, клинические признаки, патологоанатоми­ческие изменения, результаты бактериологического иссле­дования. Дифференцировать нужно от колибактериоза, сальмонеллеза, пастереллеза, диспепсии. При колибактериозе выражен сепсис, но нет пневмонии; при сальмонеллезе на­ходят сепсис и сальмонеллезные узелки в печени; при пастереллезе есть крупозная пневмония, но нет септической селезенки; при диспепсии нет сепсиса.

1.2.4. Диагностика стрептококкозов

Диагностика стрептококкозов. Материал для исследования: при подозрении на мастит коров исследуют паренхимное молоко; на мыт лошадей — прижизненно исследуют носовые истечения, содержимое абсцессов лимфатических узлов (пунктат), для посмертной диагностики — кровь из сердца, кусочки печени, легких, селезенки; на септические стрептококкозы — кровь из сердца, паренхиматозные органы, костный мозг.

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на ре-зультатах бактериоскопического исследования, выделения чистой бактериальной культуры, биохимических, серологических исследований и биопробы.

Морфология. Микроскопия препаратов из исходного материала. Препараты окрашивают по Граму и на капсулы. Все стрептококки грамположительные сферические или овальные клетки, диаметром 0,5–1,5 мкм, расположенные в цепочку различной длины, спор не образуют, неподвижные. Особо вирулентные штаммы образуют капсулу.

Культуральные свойства. Стрептококки — факультативные анаэробы. На обычных питательных средах растут слабо. Для культивирования используют обогащенные среды: МПА с 1%-ной глюкозы и 5% крови барана или кролика; МПБ с 1%-ной глюкозы и 10%-ной инактивированной сыворотки крови лошади. Оптимальная температура роста 37−38 ºС (от 25 до 45 0С). Streptococcus agalactiae: в глюкозо-кровяном бульоне среда остается прозрачной, формирующиеся крупинки оседают на дно; на глюкозо-кровяном агаре — колонии мелкие, сероватые, просвечивающиеся с бета- или двойной зоной альфа-гемолиза. Streptococcus equi: в МПБ рост с помутнением среды и образованием хлопьевидного осадка. Через 3−5 сут. культивирования бульон просветляется, на дне пробирки осаждается плотный осадок. На МПА колонии мелкие, росинчатые, слизистые, округлой формы с зоной бета-гемолиза, позднее становятся серо-белыми. Streptococcus pneumoniaе: в МПБ растет с равномерным помутнением среды; на МПА колонии круглые, полупрозрачные, плоские, с приподнятым центром и краями, с зоной альфа-гемолиза. Streptococcus pyogenes: в МПБ растет с просветлением среды и выпадением зернистого осадка; на МПА колонии мелкие, прозрачные, округлой формы, с зоной бета-гемолиза (рис. 1.2, 1.3).

Рис. 1.2. Streptococcus pyogenes на кровяном агаре

Биохимические свойства

Streptococcus agalactiae: не разжижает желатину, не редуцирует и не свертывает метиленовое молоко; ферментирует углеводы лактозу, сахарозу, глюкозу, мальтозу; не ферментирует сорбит и дульцит; вызывает гидролиз гиппурата натрия. Проявляют гемолиз в условиях САМР-пробы (на кровяной агар в чашках Петри бактериологической петлей по диаметру засевают в виде полоски гемолитический стафилококк. Отступив 2−3 см, перпендикулярно к стафилококку петлей высевают штаммы исследуемых стрептококков, помещают в термостат (37 0С) на 24 ч).

Во всех случаях выделения агалактийного стрептококка в пробах молока высокое содержание лейкоцитов, ослабление лизоцимной активности, положительная проба Уайтсайда (лейкоцитоз), положительная бромтимоловая проба на щелочность молока.

Вирулентность патогенных стрептококков обусловлена тем, что они вырабытывают токсины. Так, Streptococcus agalactiae продуцирует гемолитический, некротический, лейкоцидин, эритрогенный токсин (обусловливает местную воспалительную реакцию тканей), вырабатывает ферменты фибринолизин и гиалуронидазу, усиливающие его патогенность.

Streptococcus equi: не свертывает молоко, не редуцирует лакмус и метиленовый синий, не сбраживает лактозу, сорбит, манит, что позволяет дифференцировать от других стрептококков; не растет в присутствии мытного антивируса (фильтрат 20-дневной бульонной культуры мытного стрептококка), в то время как все остальные виды стрептококков растут.

Streptococcus pneumoniaе: ферментирует углеводы лактозу, сахарозу, глюкозу, мальтозу, салицин, инулин; не разжижает желатину, не образует индол, свертывает молоко; растворяется в желчи. Отношение к желчи и разложение инулина имеет дифференцирующее значение от других стрептококков.

Серологическая типизация выделенного стрептококка определяется в реакции кольцепреципитации с использованием преципитирующих групповых стрептококковых сывороток и суточной бульонной культуры.

Биопроба. Биопробу на стрептококкозы проводят на белых мышах с применением свежевыделенных штаммов 18−20-часовых бульонных культур. Культуру вводят трем мышам внутрибрюшинно по 0,5 мл.

При гибели не менее двух мышей культуру признают патогенной.

В случае инфекции, вызванной Streptococcus pneumoniae, проводят выделение возбудителя из исследуемого материала методом биопробы (тканевую суспензию, разведенную в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:2, внутрибрюшинно вводят белым мышам).

В положительных случаях мыши погибают через 1−2 сут.

Схемы лабораторной диагностики и биопрепараты. См. Приложения.

1.3. Возбудители стрептококкоза свиней

Стрептококкоз свиней — чаще является главной причиной потерь подсвинков и поросят — откормочников. У поросят наиболее часто стрептококки вызывают менингит, который вызывается Streptococcus suis типа 1 и особенно типа 2. Streptococcus suis типа 1 вызывает септицемию, менингит и артрит у поросят-сосунов. Свиноматка является переносчиком инфекции, которая проникает через миндалины в организм поросят и вызывает повышение температуры, а в отдельных случаях приводит к смерти. Другие поросята того же помета могут иметь менее тяжкие клинические симптомы. Артрит, приобретенный в возрасте 5−10 дней, может проявляться впоследствии у взрослых свиней и приводит к снижению их репродуктивности. Микроб легко выделяется из организма поросят, погибших в стадии септицемии, из мозга и суставов животных с признаками менингита и артрита. Streptococcus suis типа 2 является наиболее частым виновником стрептококкового менингита у свиней. Микроб может вызвать септицемию, но основные клинические симптомы — это менингит у свиней — отъемышей до 70 кг, хотя могут быть поражены и взрослые свиньи, со слабым иммунитетом. У инфицированных свиней повышается температура, «стекленеют» глаза, могут быть судороги головы или конвульсии, они погибают в течение нескольких часов или выживают, если болезнь длится несколько дней. Поражение мозга у свиней может быть длительным.

В связи с имеющейся полиса­харидной оболочкой у восприимчивых (не имеющих типичных антител) животных инфекция эта охраняется от фагоцитоза, кроме прочих определяет его болезнетвор­ность. В настоящее время известны 35 имеющих оболочку серотипов S. suis. Часть изолированных штаммов невозможно клас­сифицировать ни в одной группе сероти­пов, и это связано с отсутствием оболочки. Идентифициро­вано два протеина, связанные с вирулент­ностью S. suis тип 2. Первый высвобождается мурамидазой (MRP), и другой, который ввиду проявле­ния только в супернатанте, назвали внекле­точным фактором (EF). Считается, что эти белки являются факторами вирулентности, играющими существенную роль в патоге­незе заражения этим микроорганизмом. Если болезнь протекает с клиническими признаками, характерными для стрептокок­коза, изолируются, кроме того, серотипы от 1 до 8 S. suis. Стрептококки S. suis можно изолировать также и от здоровых свиней. Результаты молекулярных исследований показывают, что в области каждого серо­типа S. suis имеется целый ряд генотипов этого микроорганизма. На ферме, которой коснулась энзоотическая форма стрепто­коккоза, болезнетворный генотип S. suis тип 2 может одновременно иметь болезнетвор­ные и непатогенные штаммы S. suis. Во время эпизоотии стрептококкоза на свино­ферме можно изолировать одновременно от поросят оба вида этих штаммов, что может осложнить производство вакцины. Свиньи являются главным источником и вектором в распространении S. suis. Есть много вос­приимчивых к заражению этими микроор­ганизмами пород домашних и используе­мых свиней, а также птиц и грызунов. Из миндалин, из половой системы и кишеч­ника здоровых животных можно изолиро­вать ряд стрептококков. Микроорга­низмы эти считаются составляющими бак­териальной флоры кишечника (S. intestinalis, S. hyointestinalis, S. suis, S. alactolyticus). От даже одной здоровой особи можно иногда изолировать много се­ротипов стрептококка. Исследуя свиней на наличие S.suis, в 31% случаев изолирован от свиней только один серотип S. suis, в 38% — 2 или 3 серо­типа, и в 6% более чем 4 серотипа. Особое внимание ученых обращено на факт изоля­ции S. suis от все большего числа пород животных и птиц. Это явление с уверенно­стью может иметь существенное значение в распространении инфекции этим микроор­ганизмом.

Устойчивость. Streptococcus suis имеет большие спо­собности выживания вне организма свиней — в воде при температуре 4 0С живет в тече­ние почти 2 недель, в кале при температуре 0 0С живет до 15 недель. При комнатной температуре сохраняет инфицирующие способности до 2 недель. Стрептококки очень восприимчивы ко всем обеззаражи­вающим средствам и к детергентам. 30-минутное воздействие мыла приводит к их инактивации.

Патогенез. Источником стрептококков обычно яв­ляются клинически здоровые носители этих микроорганизмов. Введение в восприимчи­вое к заражению стадо распространителей патогенных штаммов S.suis вызывает рез­кое проявление стрептококкоза, прежде всего, в группах отсаженных поросят и под­свинков. Заражение новорожденных может произойти уже в первые дни и даже часы их жизни. Это происходит аэрогенным пу­тем, а также и в результате питья порося­тами инфицированного молозива или мо­лока. Возможно заражение через родополовые пути, где он часто бытует. Воротами проникновения стрептококков в организм из зараженной среды является также пораженный эпителий сли­зистой оболочки полости губы новорож­денных, как следствие неправильного срезания клыков, в результате чего появля­ется местное повреждение и некроз проти­воположной десны. Несмотря на то что большинство отсаженных поросят инфи­цированы S. suis, только некоторые из них заражены штаммами, способными вызвать болезнь. Вектором в распространении стрептококкоза могут быть блохи. В орга­низме стрептококки живут до 5 дней.

Важную роль в патогенезе играет моно­циты. Выполняют они только роль «пере­носчика» штаммов S. suis из миндалин в мозг, суставов и сывороточных оболочек организма, но являются также формой ин­кубатора, в котором микроорганизмы эти могут размножаться. Эти клетки могут пе­реносить болезнетворные штаммы, зато они не способны «перемещать невирулент­ные штаммы. Большинство научных работ, касающихся патогенеза стрептококкоза, относятся к стрептококковому воспалению оболочек мозга. Гораздо хуже изучен пато­генез очень важной актуальной проблемы, которой является воспаление легких, свя­занное с инфицированием подсвинков или откормочников S. suis тип 2. Доказано, что на свинофермах, инфицированных вирусом PRRS и S. suis, число случаев стрептококко­вого воспаления оболочек мозга намного больше, нежели в хозяйствах, инфициро­ванных исключительно S.suis.

Независимо от клинической формы стрептококкоза, первичным местом суще­ствования стрептококков являются минда­лины. Отсюда микроорганизмы попадают в периферийные лимфатические узлы, в ко­торых могут быть задержаны, что блоки­рует развитие болезни, или в случае сниже­ния их сопротивляемости попадают в кровь, вызывая сепсис. С кровью могут по­пасть в оболочки мозга, суставов, легких, сердца и иные органы. Клинические прояв­ления стрептококкоза зависят от места, куда проникли стрептококки, а также сте­пени повреждения инфицированных орга­нов.

Клинические признаки. В течении стрептококкоза можно на­блюдать очень разные клинические сим­птомы, связанные с воспалением: оболочек мозга, легких, суставов, слизистых обо­лочек, детородных путей, сердечной мышцы и с септицемией и околобронхи­альным воспалением легких. Клинические симптомы болезни наблюдаются у свиней разного возраста, как у недельных поросят, так и у 70-килограммовых откормочников, и даже у свиноматок. При острой форме стрептококкоза ее течение может быть бес­симптомным, а единственным симптомом проявления болезни в стаде являются вне­запный падеж отсаженных подсвинков или откормочников. Температуры тела повы­шается до 42,5 0С.

В практике вызывающими подозрение признаками являются поражения и кон­вульсии, связанные с воспалением оболо­чек мозга. При визуальным наблюдении стада можно заметить нарушение коорди­нации движений, в том числе «забрасыва­ние зада», нарушение естественного пове­дения, отставание поросят от группы, по­теря аппетита, связанное с этим похуде­нием (рис. 1.4).

При суставной форме стрептококкоза спустя несколько дней обнаруживается наличие лежащих на боку поросят, выпол­няющих конечностями весельные движе­ния; иногда из пасти выделяется пенистая слюна, а у некоторых поросят наблюдается нистагм. Последствием укрепления стреп­тококка в суставах являются воспалитель­ные признаки, проявляющиеся в отеке и связанной с этим хромоте. У свиноматок S. suis бывает причиной выкидышей или воспалительных изменений во влагалище, что проявляется в виде катаральных выде­лений их детородных путей свиноматок. S. suis может быть причиной сниженной даже до 15% результативности покрытия, рождение мертвых плодов и резкого падежа поросят в первые 24 ч жизни.

Streptococcus suis вызывает воспаление перикарда, его последст­вием является падеж откормочников с при­знаками цианоза. В Польше S. suis все чаще является причиной воспалительных изме­нений в легких главным образом у свиней с массой тела 20−60 кг. Ввиду диагности­ческих трудностей фактор болезни не все­гда бывает обнаружен. Интересно, что в Великобритании стрептококкоз связывают, прежде всего, с сепсисом, воспалением оболочек мозга, воспалением суставов, и редко с воспале­нием легких, в то время как в США и в Голландии S. suis считают главным этиоло­гическим фактором воспаления легких и только потом причиной воспаления обо­лочек мозга, воспаления эндокарда и суста­вов.

Патологоанатомические изменения. К изменениям, ха­рактерным для стрептококкоза у свиней относятся: увеличение бронхиальных лимфатиче­ских узлов, брыжейки и селезенки; гипере­мию и заметно налитые кровеносные со­суды оболочек мозга, увеличенное количе­ство мозговой жидкости. Типичным явля­ется фибринозно-гнойное воспаление пе­рикарда, который иногда полностью по­крыт фибрином. В сумке перикарда и в грудной клетке обнаруживается большое количество сывороточной выпотной жид­кости. В легких отмечается до­лечное воспаление легких и часто фибри­нозное воспаление плевры. Характерной чертой также является наличие транссудата и отложение фибрина между петлями ки­шечника. Могут про­изойти воспалительные изменения суставов конечностей.

Меры профилактики. В инфицированных S. suis тип 2 стадах риск всплеска болезни увеличивается вме­сте с частым воздействием стрессовых факторов; неправильным обрезанием клыков; шероховатой поверхностью полов, на которой находятся поросята; слабой молочностью свиноматки и свя­занной с этим борьбой поросят-сосунов за «хоро­шее место» при молочной железе; скученным содержанием в станках; частыми перемещениями и смешива­нием разных групп свиней; появлением в стаде вируса РРСС; несоблюдением зоогигиенических требований (плохой системой вентиляции и освещенности, высокой влажностью и запыленностью и др.); необоснованной и резкой сменой корма; нехваткой витаминов Е и селена.

Общая схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. Приложения.

Глава 2.
Грамположительные бактерии, не образующие спор

2.1. Возбудители туберкулеза

Туберкулез — хроническое инфекционное заболевание сельскохозяйственных и диких животных, птиц, а также человека, характеризующееся образованием в пораженных тканях и органах специфических бугорков (туберкулов), предрасположенных к творожистому распаду. Наиболее восприимчивы к туберкулезу крупный рогатый скот, свиньи и куры.

В последние годы в России отмечен рост туберкулеза среди населения, а в настоящее время Россия входит в первую десятку наиболее неблагополучных стран.

Возбудитель выделен в 1882 г. Р. Кохом (Р. Кох — немецкий микробиолог. Открыл бациллу сибирской язвы, холерный вибрион и туберкулезную палочку. В 1890 г. изготовил туберкулин. За исследования туберкулеза в 1905 г. награжден Нобелевской премией по физиологии и медицине).

Возбудители туберкулеза относятся к роду Mycobacterium, семей­ству Mycobacteriaceae. Различают следующие основные виды возбудителя туберкулеза: М. tuberculosis — возбудитель туберкулеза человека; М. bovis — возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота; М. avium — возбудитель туберкулеза птиц; M. murium — вид возбудителя туберкулеза мышей-полевок; М. poykilothermorum вид возбудителя туберкулеза холоднокровных. В патологии животных и человека участвуют первые три вида возбудителей туберкулеза.

Атипичные микобактерии. Наряду с истинными возбудителями туберкулеза в природе встречаются атипичные, что обусловливает их попадание в организм животных. Различают четыре группы атипичных микобактерий (по Е. Раньон, 1959).

1. Фотохромогенные, приобретающие на свету темно-оранжевую окраску. В темноте — не образуют пигмент (М. kansassii).

2. Фотохромогенные, приобретающие ярко-оранжевую окраску независимо от выращивания на свету или в темноте (М. scrofulaceum, M. Gordonae, M. Aquae и др.).

3. Нефотохромогенные — могут быть неокрашенными или иметь желтовато-оранжевые оттенки. Пигментация не зависит от экспозиции на свету (М. intracellulare, M. Battey).

4. Быстрорастущие — образуют колонии в течение недели при 25 и 37 0С (M. phlei, M. smegmatis, M. fortultum).

Морфология. Виды микобактерий туберкулеза отличаются по морфологическим и культуральным свойствам. M. tuberculosis — тонкая, нежная, слегка изогнутая палочка; M. bovis — толще и короче, чем M. tuberculosis; M. avium — короче, по сравнению с M. tuberculosis и M. bovis и более полиморфна. В электронном микроскопе микобактерии всех видов имеют вид палочки с закругленными концами.

Размеры и формы микобактерий могут иногда варьировать, в зависимости от питательной среды, условий культивирования, возраста культуры.

В последние годы часто выделяют атипичные L-формы возбудителя туберкулеза. Это измененные формы, которых выделяют в виде мелких зерен, шаровидных тел. L-формы обладают способностью к реверсии (т. е. переходить в типичные, патогенные формы, вызывающие заболевания).

Микобактерии туберкулеза спор и капсул не образуют, неподвижны, аэробы. Высокая устойчивость микобактерий во внешней среде обусловлена тем, что они относятся в группу кислото-спирто-щелочеустойчивых, которые содержат в своем составе жировосковые вещества и миколовую кислоту (до 60%). В цитоплазме располагаются кислотолабильные гранулы, состоящие в основном из метафосфата (зерна Муха). Липиды и воскоподобные вещества придают микробной клетке гидрофобность, т. е. способность отталкивать воду и водные растворы красителей, кислот, щелочей, в связи с чем бактерии туберкулеза плохо воспринимают окраску.

Диагностика

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики: истечения из носа, бронхиальная слизь, молоко, сперма, фекалии, моча.

Для посмертной диагностики: труп птиц целиком (исследуют печень, селезенку, легкие, яичники). От крупных животных — кусочки пораженных тканей и органов с туберкулами, лимфатические узлы. Материал свежий, замороженный или в 30%-ном глицерине.

Обсемененность патологического материала микобактериями ту­беркулеза может быть незначительной, поэтому для получения достоверных диагностических результатов специальными методами обработки повышают концентрацию возбудителя. К обработке предъявляют ряд требований: она должна обеспечивать гомогенизацию материала, уничтожать сопутствующую микрофлору, быть щадящей для микобактерий туберкулеза и способство­вать их концентрации в материале (обогащение). Обогащение проводят в зависимости от исследуемого материала:

мокрота, слизь, гной — заливают равным объемом трехзамещенного фосфата натрия (на 24 ч в термостат). Центрифугируют при 3000 об./мин 10−15 мин. Исследуют осадок;

пораженные ткани — готовят гомогенат, заливают 3−10%-ным раствором H2SO4 (1:4). Центрифугируют при 3000 об./мин 10−15 мин. Отмывают физиологическим раствором. Исследуют осадок;

молоко −150 мл. Центрифугируют при 3000 об./мин 20−30 мин. Осадок обрабатывают 3−6%-ным раствором H2SO4 20−30 мин. Центрифугируют, исследуют осадок;

масло — (2−4 г) в стерильную пробирку. Залить горячей водой, встряхивать 5−10 мин. Перевернуть, охладить. Исследовать жидкость как молоко;

фекалии — (50 г) растирают в 18%-ном растворе Н2SО4, фильтруют через марлю, центрифугируют. Исследуют осадок.

Для концентрации микобактерий в исследуемом материале применяют также метод флотации. В колбу с узким горлом вносят 10 мл гомогената + 10 мл 1%-ного NaOH, шуттилируют 10 мин. Затем + дистиллированную воду (1:9) + 1−2 мл ксилола (бензина, петролейного эфира), шуттилируют 10 мин + еще дистиллированную воду до горлышка. Через 30 мин исследуют содержимое флотационного кольца.

Лабораторная диагностика туберкулеза основана на результа­тах бактериологического, аллергического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (методом световой и люминесцентной микроскопии и биопробой), выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и патогенным признакам.

Бактериоскопия препаратов из исходного материала. Из-за специфического состава (30,0–40,0% липиды) микобактерии туберкулеза не окрашиваются обычными методами, но хорошо воспринимают краску после обработки карболовым фуксином при подогревании. Их красят специальным методом — по Цилю — Нильсену: добавляют карболовый фуксин (при подогревании), промывают водой, затем обесцвечивают мазок 5%-ным раствором серной кислоты (2 мин) и снова промывают водой, проводят дополнительно обесцвечивание 70−90%-ным этиловым спиртом (3−5 с), докрашивают раствором метиленовой сини (или малахитовой зелени).

Микроскопическая картина: микобактерии окрашиваются в ярко-красный цвет, остальная микрофлора — в синий, или в зеленый (рис. 2.1).

При окрашивании по Граму применяют модифицированный метод Грамм — Муха: на фиксированный мазок вносят карболовый метилвиолет (красят при подогревании), затем на 1 мин вносят раствор Люголя и обесцвечивают 5%-ной азотной кислотой (либо 3%-ной соляной кислотой, либо смесью ацетона и спирта), затем докрашивают сафранином или разведенным фуксином.

Рис. 2.1. Микобактерии туберкулеза.Окраска по Цилю — Нильсену

Микроскопическая картина: микобактерии фиолетового цвета, остальные микроорганизмы — красного цвета

Бактериоскопический метод позволяет выявить возбудителя при концентрации микобатерий (1−5) х 105/мл. Более результативна люминесцентная микроскопия (окраска аурамин-родамином), благодаря которой выявляют даже незначительное количество микобактерий, которые окрашены в бело-желтый цвет, а также формы с измененными тинкториальными свой­ствами.

Культуральные свойства. Возбудитель туберкулеза — строгий аэроб. Оптимальная температура для: M. tuberculosis — 37−38 0С, M. bovis — 38−39 0С, M. avium — 39−41 0С. Оптимум рН среды 6,8−7,4.

Рас­тут медленно. Для культивирования микобактерий туберкулеза используют сложные питательные среды, содержащие глицерин, картофель, яйца, витамины. Рост бактерий стимулируют: аспарагиновая кислота, альбумин, глюкоза, биотин, никотиновая кис­лота, соли аммония и др. Наиболее часто применяют среды Петраньяни, Левенштейна — Иенсена, Гельберга.

M. tuberculosis — на жидких средах к концу месяца образуется толстая морщинистая пленка (рис. 2.2). На плотных питательных средах — рост в виде сухого морщинистого налета кремового цвета. У колоний при­поднятый центр, они крошковидные, с приятным запахом, по виду напоминают цветную капусту, плохо смачиваются водой.

На жидких средах при внутриклеточном развитии для M. tuberculosis характерно образование корд-фактора (трегалоза-6,6-дипилокат), способствующего сближению бактериальных клеток в микроколониях в виде серпантинообразных «кос» (рис. 2.2).

M. bovis — на жидких средах через 20−60 дней образуется пленка вначале в виде единичных островков, которые затем сливаются в сплошную петлистую, бородавчатую пленку. На плотных средах — колонии мелкие, гладкие, цвета слоновой кости, иногда с морщинистым сероватым налетом.

Рис. 2.2. Рост M. tuberculosis на плотной и жидкой питательной среде

M. avium — на жидких средах через 10−20 дней сначала образуется тонкая, нежная пленка, которая затем становится слегка морщинистой, влажной, жирной, образуется небольшой рыхлый осадок. На плотных яичных средах — колонии округлые, слизистые, мягкие, серовато-белые, маслянистые, с возрастом желтеют, иногда образуют возвышение с кратерообразным углублением.

Mycobacterium tuberculosis — патогенны для человека, крупного рогатого скота, свиней, собак, кошек. Из лабораторных животных восприимчивы кролики, морские свинки.

Рис. 2.3. Серпантинообразные «косы»из микобактерий туберкулеза (корд-фактор)

Mycobacterium bovis — патогенны для крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей, кошек, собак, оленей, маралов и др. Из лабораторных животных восприимчивы кролики, морские свинки. Восприимчив человек.

Mycobacterium avium — вызывает туберкулез кур, индеек, цесарок, фазанов, павлинов, голубей, уток и др. птиц. Также к нему восприимчивы свиньи, лошади, козы, овцы и иногда крупный рогатый скот и человек. Из лабораторных животных чувствительны кролики. Для биопробы от птиц используют кур.

Биопроба. Метод применяют не только для обнаружения возбудителя в исследуемом материале (рис. 2.4), но и для определения его видовой принадлежности.

Заражают: двух морских свинок — по 1−2 мл суспензии материала подкожно в область паха; двух кроликов — внутривенно; двух кур внутривенно (морских свинок и кур после туберкулинизации!). Наблюдают 3 месяца. При положительном результате у морских свинок через 2−3 недели увеличиваются регионарные лимфоузлы, на месте инъекции образуется уплотнение, затем язва. Через 30 дней морскую свинку тубекулинизируют. При положительной реакции подвергают убою и бактериологическому исследованию. При обнаружении в мазках микобактерий дают положительное заключение и дальнейшее биологическое исследование прекращают.

Рис. 2.4. Биопроба на туберкулез

Вид микобактерий устанавливают по результам биопробы (табл. 2.1).

Таблица 2.1

Патогенность микобактерий туберкулеза для лабораторных животных

Серологическая диагностика: постановку РСК рекомендуют как дополнительный метод при отборе для диагно­стического убоя животных, положительно реагирующих на ту­беркулин.

Аллергическая диагностика. Не принадлежит к лабораторным методам, но на практике является основным методом прижиз­ненного определения инфекции у животных, в том числе у птиц (рис. 2.5).

Рис. 2.5. Положительная внутрикожная реакция на туберкулин:а — крупный рогатый скот; б — свиньи; в — куры

Применяют сухой очищенный туберкулин (протеин-пурифиед-дериват: ППД), который вводят крупному рогатому скоту, буйволам, верблюдам, оленям в толщу кожи в области средней трети шеи, свиньям — на наружную поверхность уха, курам — в толщу кожи бородки.

У крупного рогатого скота (буйволов, верблюдов, оленей) реакцию учитывают через 72 ч, измеряя толщину кожной складки с учетом припухлости. Поло­жительной реакцией считают тестоватый отек кожи размерами 35 х 45 мм и более. Кожная складка увеличивается на 3 мм и более. Для измере­ния кожной складки используют кутиметр.

У свиней учет реакции через 48 часов — большая болезненная припухлость на месте инъекции туберкулина. У кур реакцию учи­тывают через 30−36 ч — при положительной реакции бородка опу­хает, становится горячей.

Крупным животным проводится внутриглазная туберкулиновая проба. Туберкулин (3−4 капли) вводится в область внутреннего угла глаза. Учет реакции через 6−12 часов. Положительная реакция — гнойный кератоконъюктивит (рис. 2.6).

Аллергическая диагностика позволяет поставить диагноз в начальной стадии развития болезни. При положительной повторной аллергической реакции животных сдают на специфический убой на мясокомбинат.

Рис. 2.6. Положительная внутриглазная проба на туберкулин: а — крупный рогатый скот; б — коза; в — верблюд

Патогенез. Заражение происходит: аэрогенным (воздушно-капельным и воздушно-пылевым), алиментарным (через рот) путем, через кожу и слизистые оболочки. Доказано внутриутробное инфицирование плода.

При развитии туберкулезного процесса в местах размножения возбудителя образуется защитный очаг — туберкул. Основу туберкула составляют фагоциты, формирующие узелок. Узелок окружается соединительнотканной капсулой. Ткань внутри узелка из-за отсутствия притока питательных веществ и под действием токсинов возбудителя отмирает и превращается в творожистую массу.

Исход первичного туберкулезного процесса может быть различным. Инкапсулированные первичные очаги часто обызвествляются и вместе с туберкулезными палочками сохраняются в организме длительное время. При пониженной резистентности организма процесс инкапсуляции в первичном очаге выражен слабо, регенерация соединительной ткани недостаточна, это приводит к расплавлению стенок туберкулезного узелка. Микобактерии попадают в здоровую ткань, что приводит к образованию множества мелких узелков, которые, сливаясь между собой, образуют крупные туберкулезные фокусы. Отсюда микобактерии могут попасть в кровь и способствовать развитию туберкулезных очагов в разных органах (рис. 2.7).

Рис. 2.7. Туберкулы в пораженных органах:а — надвыменный лимфатический узел коровы;б — печень; в — трубчатая кость; г — легкие; д — лимфатические узлы; е — кишечник

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. Приложения.

2.2. Возбудитель паратуберкулезного энтерита (паратуберкулеза)

Паратуберкулез — это хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся профузным поносом, истощением, поражением кишечника с образованием отечно-воспалительных складок слизистого и подслизистого слоя (напоминающих мозг), увеличением мезентериальных лимфатических узлов.

Болеет преимущественно крупный рогатый скот, реже верблюды и овцы и еще реже козы и олени.

Возбудитель Micobacterium paratuberculosis (1895, Ионе, Фротингель). В Россию паратуберкулез был занесен с импортным племенным скотом и описан К. Г. Болем (1927).

Морфология — возбудитель — короткая палочка, от 0,5 до 1,5 мкм. Спор и капсул не образует, неподвижная, кисло-устойчивая, Гр+. Полиморфная (иногда напоминает гранату, бутылочку, располагается в виде бесструктурных глыбок, красится специальным методом по Цилю — Нильсену (рис. 2.8). В патологическом материале (пораженные части слизистой кишечника, слизь) бактерии располагаются в виде скоплений, редко одиночно, или группами по 2–4 клетки. В окрашенных препаратах скопления обнаруживаются и просматриваются даже при малом увеличении.

Культуральные свойства — выделение чистой культуры очень затруднительно (большая загрязненность посторонней микрофлорой). Материал предварительно подвергают специальной обработке 5%-ным раствором Н2 SО4 или применяют специальные сложные методы обработки с использованием фильтрации, центрифугирования, флотации.

Посев осуществляется на специальные питательные среды с добавлением вытяжки из убитых бактерий туберкулеза или кислоустойчивых сапрофитов (бактерия тимофеевой травы Bact. phlei). Это очень сложные среды. Например: среда Дюбо — Смита: К2НРО4 — 1,0; Na2HPO4 — 6,25; MgSO4 — 0,01; CaCl2 — 0,0005; ZnSO4 — 0,0001; CuSO4 — 0,0001; лимонно-кислое аммонийное железо — 0,05; аспарагиновая кислота — 1,0; гидролизат казеина — 80,0 мл; спиртовый экстракт Bact. Phlei — 20,0 мл; сыворотка крови крупного рогатого скота –20,0%; пенициллин –50 ЕД/мл; агар-агар –15,0; дистиллированная вода — 1000 мл.

Среда Данкина: Bact. Phlei, выращенные в 4%-ном глицериновом бульоне; глицерин — 10,0; печеночный экстракт — 10,0; свежие куриные яйца — 3 шт.; спиртовый экстракт генцианвиолета.

Особое значение приобрела среда Вишневского, содержащая аспарагин, щавелевокислый аммоний, сернокислый магний, сернокислое железо, глицерин. Для культивирования благоприятна температура 38 0С. Первые признаки роста с момента посева появляются через 6 недель, иногда через 7 месяцев.

На жидких средах (Данкина, Вишневского, Дорсета, Бокэ, Генлея) образуют нежную, беловатую пленку, которая через 3–4 мес. культивирования, в силу своей тяжести, опускается на дно пробирки.

На плотных средах (яичные среды Петраньяни, Гельберга, Левенштейна, агаризированная среда Сотона) вначале вырастают изолированные сухие, серовато-желто-белые мелкие колонии, которые затем приобретают вид сосочков, и появляется бугристость (рис. 2.8 б).

Антигенная структура. Изучена недостаточно. Установлено антигенное родство с Mycobacterium avium.

Устойчивость. В почве и навозе сохраняет до 12 мес., в кормах и воде непроточных водоемов — до 8−10 мес., в моче — до 7 сут. Солнечный свет убивает его через 10 мес. В молоке, в закрытых сосудах, при нагревании до 63 0С погибает через 30 мин, при 65 0С — через 25 мин, при 85 0С — через 1–5 мин.

Рис. 2.8. Паратуберкулезный энтерит: а) возбудитель Мicobacterium paratuberculosis, окраска по Цилю — Нильсену; б) колонии возбудителя; в) кишечник больного крупного рогатого скота;г) паратуберкулез у коровы

Чувствителен к 10−20%-ным растворам хлорной извести, 5%-ным растворам формалина, лизола, фенолятов натрия, феносмолина. Слабочувствителен к антибиотикам, сульфаниламидным препаратам, противомикробным, противотуберкулезным препаратам.

Патогенность. К микобактерию паратуберкулеза чувствительны и болеют крупный рогатый скот (особенно молодняк), буйволы, верблюды, овцы, козы. Не болеют лошади, мулы, свиньи. В качестве лабораторных животных служат кролики, мыши, хомяки. Морские свинки, куры используются для сенсибилизации при изучении аллергии.

В лабораторию посылают:

При жизни: фекалии с комочками слизи или крови, соскобы со слизистой оболочки прямой кишки.

Для посмертной диагностики: пораженный участок кишечника вместе с содержимым, перевязанный с двух сторон лигатурой и брыжеечные лимфоузлы в 30%-ном растворе глицерина. Для гистологического исследования посылают материалы в 10%-ном растворе формалина.

Диагностика:

1) бактериоскопия;

2) посев на питательные среды;

3) биопробу не ставят (лабораторные животные не восприимчивы!!!);

4) РСК с сывороткой крови (с паратуберкулезным антигеном — метаноловый экстракт Micobacterium paratuberculosis). Подтверждает клинические формы паратуберкулеза у 85% исследуемых животных (когда аллергическим методом невозможно подтвердить диагноз). Недостаток РСК — отрицательный результат в доклинический период.

5) аллергическая диагностика (в области средней трети шеи — двойная внутрикожная проба туберкулином для птиц или паратуберкулином).

Специфическая профилактика — не разработана.

2.3. Возбудитель эризипелоидоза (рожи свиней)

Рожа свиней — инфекционное зооантропонозное септическое заболевание, характеризующееся кровоизлияниями на серозных и слизистых оболочках, крапивницей, геморрагическим гастроэнтеритом, нефритом, увеличением селезенки. При несвоевременной диагностике и принятии мер, животные часто погибают. Возможен переход в хроническую форму.

Возбудитель — Erysipelothrix rhusiopathiae, род Erysipelothrix. Открыт в 1882 г Л. Пастером и Л. Тюилье.

Морфология и тинкториальные свойства. В лабораторию направляют труп животного целиком или паренхиматозные органы (печень, селезенку, почку, сердце), трубчатую кость, при хроническом течении — обязательно сердце. Материал посылают свежим, или консервируют в стерильном 30%-ном растворе гли­церина. В положительных случаях в материале нахо­дят мелкие грамположительные палочки, располагающиеся оди­ночно, попарно или в виде скоплений. Возбудитель представляет собой прямую или слегка изогнутую мелкую тонкую палоч­ковидную грамположительную бактерию без спор, капсул и жгути­ков, размером (0,2− 0,3) х (0,8−2,5) мкм. В препаратах из поражен­ных клапанов сердца при хроническом течении болезни возбуди­тель обнаруживают в форме нитей (рис. 2.9). Препараты из органов окрашивают по Граму и методом флюоресцирующих антител. В мазках, окрашенных флюоресцирующей сывороткой — нахо­дят светящиеся клетки бактерий типичной морфологии. При сомнительных и отрицательных результатах (слабое свечение, атипичные формы бактерий, отсутствие свечения) проводят бактериологическое исследование по общепринятой методике.

Культуральные свойства. Посевы проводят на МПА, в МПБ или бульон Хоттингера, молоко, полужидкий агар (МПБ с 0,05 по 00,15% агара), кровяную сыворотку с углеводами, среду Сент-Иваньи (агар с 0,1% кристалл-виолета и 1% азида Na). Erysipelothrix rhusiopathiae — факультативный анаэроб, в первых генерациях ведет себя как микроаэрофил. Температурный оптимум 36−37 0С, рН 7,2−7,5.

Рис. 2.9. Erysipelothrix rhusiopathiae: а — в препарате из патологического материала при острой форме;б — образование нитей на клапанах сердца при хроническойформе течения болезни

В МПБ — слабое помутнение пи­тательной среды, через 48−72 ч среда просветляется, на дне пробирки формируется не­значительный осадок, поднима­ющийся при встряхивании в виде нежного облачка. На плотных сре­дах — образует мелкие росинчатые колонии (S-формы) с голубоватым оттенком. При хронической форме встречаются колонии R-формы. Посевы на плотных средах из-за малых размеров колоний лучше просматривать при помо­щи лупы. На желатине при посеве уколом через 6−10 дней от серовато-белого стержня отходят горизонтальные нежные бахромчатые отростки в виде «ершика». Из культур, выросших на питательных средах, готовят мазки, окрашивают по Граму и флюоресцирующей сывороткой. При обнаружении бактерий, типичных для возбудителя рожи свиней по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам у них изучают фер­ментативные, серологические и патогенные свойства.

Биохимические свойства. Возбудитель рожи разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу; не ферментирует сахарозу, маннит, рамнозу, дульцит, эскулин; выделяет сероводород; не образует индол, каталазу; не растет в МПБ с 8,5% хлорида натрия; вирулентные штаммы синтезируют гиалуронидазу.

Серологическая идентификация. Вид Erysipelothrix rhusiopathiae подразделяют на 22 серовара, которые обо­значают цифрами. Наиболее распространены серовары 1- и 2-й (ранее обозначали А и В). Часто (в 95% случаях) от больных свиней выделяют серовар 1-й.

Для видовой серологической идентификации используют обычную лечебно-профи­лактическую противорожистую сыворотку. На предметное стекло наносят каплю иммунной противорожистой сыворотки, разведенной физиологическим раствором (1 : 50), в которой за­тем тщательно суспендируют бактериологической петлей суточ­ную агаровую исследуемую культуру. Положительный результат — быстрая агглютинация с образованием мелких плотных комочков.

Маннапова Р.Т. Микробиология и микология. Особо опасные инфекционные болезни, микозы и микотоксикозы. Учебник

Маннапова Р.Т. Микробиология и микология. Особо опасные инфекционные болезни, микозы и микотоксикозы. Учебник

Учебник состоит из четырех разделов. Первый раздел содержит подробный материал о возбудителях особо опасных инфекционных болезней животных. Второй раздел посвящен микозам и кормовым микотоксикозам. Они составлены и изложены по единому плану. Третий раздел посвящен микробиологии продуктов животного происхождения. В четвертом разделе ко всем представленным в учебнике инфекционным болезням, микозам и микотоксикозам приведены схемы лабораторной диагностики и их специфической профилактики. В конце учебника представлен терминологический словарь, сведения об основоположниках микробиологии и иммунологии и лауреатах Нобелевской премии.<br /> Предназначен для подготовки специалистов с учетом требований программы ФГОС ВО по направлению 36.05.01 «Ветеринария». Учебник может быть использован при проведении занятий по выбору, факультативных занятий и научных исследований, а также при подготовке магистров/бакалавров по направлению 36.04.01/36.03.01 «Ветеринарно-санитарная экспертиза».

Внимание! Авторские права на книгу "Микробиология и микология. Особо опасные инфекционные болезни, микозы и микотоксикозы. Учебник" (Маннапова Р.Т.) охраняются законодательством!